一、微生物污染問題

1、造成污染的原因

（1）外植體材料本身帶菌；

（2）接種過程中接種工具滅菌不徹底或者交叉污染；

（3）培養(yǎng)基滅菌不徹底。

2、防治措施

（1）外植體滅菌要徹底。首先可以選擇組織內(nèi)部無菌材料；其次根據(jù)不同的材料選擇不同的消毒劑和消毒時間；第三外植體消毒要細心，比如莖段消毒，經(jīng)過消毒處理后，要把兩端切去約0.5cm，這樣就可以大大減少污染的概率。

（2）嚴格遵守無菌操作規(guī)程。操作人員在進入接種室前一定要洗手，然后換上接種服，帶上口罩，操作之前先用75%的酒精擦拭雙手，接種工具要經(jīng)常灼燒以保證不會帶菌或者交叉污染。

（3）加抗生素。在培養(yǎng)基中適當?shù)募尤肟股乜梢杂行Х乐刮廴尽?/p>

（4）無菌培養(yǎng)環(huán)境。培養(yǎng)室內(nèi)要定期進行滅菌，可在室內(nèi)裝紫外燈，或者用高錳酸鉀和甲醛熏蒸，或者利用其它的熏蒸劑進行滅菌。

（5）控制外植體的接種數(shù)量。每個培養(yǎng)瓶中盡量接種少量的外植體。

（6）及時繼代培養(yǎng)。定期檢查組培苗的生長情況，發(fā)現(xiàn)有污染苗頭的組培苗及時轉(zhuǎn)接到新鮮培養(yǎng)基上。 

二、褐變問題

1、影響褐變的因素

（1）外植體材料的基因型；

（2）外植體的生理狀態(tài)；

（3）培養(yǎng)基成分。

2、防治措施

（1）選擇適當?shù)耐庵搀w。選擇處于旺盛生長狀態(tài)的外植體，對于容易褐變的植物注意對其不同品系的基因型進行篩選，選擇褐變率較低的材料作為外植體。

（2）在培養(yǎng)基中加入還原性物質(zhì)或者吸附劑。在培養(yǎng)基中加入偏二亞硫酸鈉、抗壞血酸、檸檬酸等抗氧化劑；或者加入0.1-1%的活性炭吸附培養(yǎng)物在生長過程中分泌的酚類、醌類物質(zhì)，但是要注意活性炭也可以吸收培養(yǎng)基中的激素使之濃度降低。。

（3）對培養(yǎng)材料進行預處理。用抗氧化劑溶液進行預處理或者在接種前用無菌水洗凈切口滲出的酚類物質(zhì)。

（4）適當?shù)呐囵B(yǎng)條件。在培養(yǎng)初期保持較低溫度（15-20℃），可以降低PPO活性，防止酚類物質(zhì)氧化，減輕褐變。

（5）其他措施，培養(yǎng)初期進行連續(xù)轉(zhuǎn)接。

三、玻璃化問題

1、影響玻璃化的因素

（1）外植體材料；

（2）培養(yǎng)的環(huán)境條件；

（3）培養(yǎng)基成分，瓊脂的濃度、碳源的種類及含量等；

（5）封口材料。

2、防治措施

（1）降低NH4+濃度，減少培養(yǎng)基中氮化物的含量。

（2）降低細胞分裂素的含量。

（3）適當增加瓊脂的濃度，以降低培養(yǎng)基的水勢。

（4）增加光照強度和光照時數(shù)。

（5）在培養(yǎng)基中加入5-10mg/L的PP333。